
Lymphopoïèse
Paul Guglielmi
1/ une vague primitive provenant, à partir de 2 jpf, de bourgeons hémogéniques à la surface du sac vitellin et
2/ une vague définitive, dépendante de cellules souches conventionnelles, prenant place dans le tissu hématopoïétique caudal puis dans le rein céphalique.
Nous complétons notre travail d'imagerie par l'analyse du transcriptome des lymphocytes B au cours de leur maturation. Nous cherchons à développer des protocoles d'analyse sur cellules individuelles isolées. Une approche du répertoire anticorps par RNA-Seq complète cette étude.
Jusqu’à une période récente, les analyses de la lymphopoïèse chez le Danio ont porté principalement sur la lignée cellulaire T en raison du manque de réactifs et de modèles biologiques spécifiques des cellules B. Nous avons établi des lignées fluorescentes de poissons transgéniques identifiant les lymphocytes B à toutes les étapes de leur maturation, permettant de tirer parti des avantages de ce modèle en termes d'imagerie sur animaux vivants. L'imagerie confocale a permis d'établir que la lymphopoïèse B du Danio se fait selon deux voies principales :
1/ une vague primitive provenant, à partir de 2 jpf, de bourgeons hémogéniques à la surface du sac vitellin et
2/ une vague définitive, dépendante de cellules souches conventionnelles, prenant place dans le tissu hématopoïétique caudal puis dans le rein céphalique.
Axe 1 : Précurseurs des lymphocytes B et répertoires anticorps primitifs
Un premier type d’approche mettra un accent particulier sur la caractérisation des précurseurs des cellules B et sur les répertoires anticorps primitifs. Nous réaliserons une analyse du transcriptome de cellules individuelles appartenant aux différents types de lymphocytes B afin de caractériser les signatures moléculaires associées aux diverses trajectoires développementales. Dans une étape de validation suivante, certaines propriétés d’anticorps représentatifs seront testées à l’aide d’immunoglobulines recombinantes chimères.
Axe 2 : Fonction des lymphocytes B du Danio en conditions infectieuses
Une deuxième série d’expériences consistera en un suivi de l’évolution des fonctions des cellules B au cours de la vie des poissons en situation stable ou lors d’interactions hôte-pathogène. Des modèles d’infections parasitaires (Trypanosoma carassii et Trypanoplasma borreli) de la carpe commune, récemment adaptés au du Danio, et caractérisés par l’activation polyclonale des lymphocytes B et T, rendent actuellement possible ce type d’approche.